【儀器信息網(wǎng) 行業(yè)應(yīng)用】本文參考NY/T1975-2010，建立了柱前衍生-液相色譜法測定水溶肥料中游離氨基酸含量的方法。實(shí)驗(yàn)表明，改方法樣品分離度好，重復(fù)性良好，而且結(jié)果準(zhǔn)確，可滿足標(biāo)準(zhǔn)的需求，供相關(guān)人員參考。

　　PART ONE實(shí)驗(yàn)部分

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　試樣用磺基水楊酸沉淀蛋白質(zhì)后，用EDTA絡(luò)合金屬元素釋放氨基酸，氨基酸經(jīng)化學(xué)衍生后由液相色譜儀分離并測定天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸和精氨酸共17種氨基酸的含量，這些氨基酸含量的總和，即為肥料中游離氨基酸的含量。

　　儀器設(shè)備與試劑

　　LC-5510液相色譜儀(配UV檢測器);

　　實(shí)驗(yàn)室常用分析設(shè)備;

　　氨基酸分析方法包;

　　磺基水楊酸溶液。

　　實(shí)驗(yàn)條件

　　色譜柱：Amino Acid，5μm，(4.6×250mm);

　　流動相：

　　流動相A：0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH6.5)：乙腈=93:7

　　流動相B：水：乙腈=20:80

　　流速：1.0 ml/min;

　　柱溫：40℃;

　　波長：254nm;

　　進(jìn)樣量：20 μL。

　　洗脫溶劑梯度洗脫見下表。

　　樣品處理

　　標(biāo)準(zhǔn)品衍生

　　分別精稱標(biāo)準(zhǔn)品溶液160μL，置于試管中，加入稀釋后的A溶液100μL和稀釋后的B溶液100μL，搖勻，室溫反應(yīng)60min;然后加入正己烷溶液400μL，旋緊蓋子后振搖10s，室溫下靜置分層，去下層200μL溶液，加入800μL水混合均勻，再取200μL加入800μL水混合均勻，用孔徑為0.22μm的有機(jī)濾膜過濾，待分析;

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