【儀器網(wǎng)  專(zhuān)題推薦】3.15晚會(huì)如期而至，此次晚會(huì)以“提振消費(fèi)從心開(kāi)始”為主題內(nèi)容。其中有關(guān)食品衛(wèi)生安全“瘦肉精——‘硬羊’背后的秘密”的問(wèn)題被特別指出。肉類(lèi)中的瘦肉精該怎么使用高效液相色譜儀檢驗(yàn)出來(lái)呢?海能技術(shù)悟空?qǐng)F(tuán)隊(duì)馬不停蹄，為您籌備了一份詳細(xì)的檢驗(yàn)實(shí)施方案。

　　中國(guó)盡管于2000年提出明令禁止應(yīng)用“瘦肉精”類(lèi)藥物，但在養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)中“瘦肉精”的應(yīng)用仍層出不窮。盡管許多國(guó)家都禁止在食源性動(dòng)物的生產(chǎn)中應(yīng)用鹽酸克倫特羅(瘦肉精)。但新聞?dòng)浾咴诂F(xiàn)場(chǎng)悄悄帶回的白色粉末以及精飼料，在經(jīng)過(guò)瘦肉精快速檢測(cè)條檢驗(yàn)后，結(jié)論均為呈陽(yáng)性。

　　實(shí)驗(yàn)部分

　　動(dòng)物性食品中克倫特羅的測(cè)定-高效液相色譜法

　　測(cè)試儀器儀表與試劑

　　1、儀器

　　高效液相色譜儀 、水浴超聲清洗器、磨口玻璃離心管、酸度計(jì)、離心機(jī)、振蕩器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、渦旋式混合器、針筒式微孔過(guò)濾膜(0.45μm)、 勻漿器 、N2 -蒸發(fā)器。

　　2、試劑

　　克倫特羅，純度≥99.5%、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、氯化鈉、高氯酸、濃氨水、異丙醇、乙酸乙酯、甲醇：HPLC級(jí)、乙醇、高氯酸溶液(0.1mol/L)、氫氧化鈉溶液(1mol/L)、磷酸二氫鈉緩沖液(0.1mol/L，pH=6.0)、異丙醇+乙酸乙酯(40+60)、乙醇+濃氨水(98+2)、甲醇+水(45+55)。

　　克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配成濃度為250mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，貯于冰箱中;使用時(shí)用甲醇稀釋成0.5mg/L的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)使用液，進(jìn)一步用甲醇+水(45+55)適當(dāng)稀釋。

　　弱陽(yáng)離子交換柱(LC-WCX)(3mL)。

　　實(shí)驗(yàn)方法

　　1、提取

　　a.肌肉、肝臟、腎臟試樣

　　稱(chēng)取肌肉、肝臟或腎臟試樣10g(精確到0.01g),用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液勻漿，置于磨口玻璃離心管中;然后置于超聲波清洗器中超聲20min，取出置于80℃水浴中加熱30min。取出冷卻后離心(4500r/min)15min。傾出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，再離心，將兩次的上清液合并。用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9.5±0.1，若有沉淀產(chǎn)生，再離心(4500r/min)10min，將上清液轉(zhuǎn)移至磨口玻璃離心管中，加入8g氯化鈉，混勻，加入25mL異丙醇+乙酸乙酯(40+60)，置于振蕩器上振蕩提取20min。提取完畢，放置5min(若有乳化層稍離心一下)。用吸管小心將上層有機(jī)相移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，用20mL異丙醇+乙酸乙酯(40+60)再重復(fù)萃取一次，合并有機(jī)相，于60℃在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干。用1mL 0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.0)充分溶解殘留物，經(jīng)針筒式微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，洗滌三次后完全轉(zhuǎn)移至5mL玻璃離心管中，并用0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.0)定容至刻度。

　　b.尿液試樣

　　用移液管量取尿液5mL，加入20mL 0.1mol/L高氯酸溶液，超聲20min混勻，置于80℃水浴中加熱30min。以下按步驟a從“用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9.5±0.1”起開(kāi)始操作。

　　c.血液試樣

　　將血液于4500r/min離心，用移液管量取上層血清1mL置于5mL玻璃離心管中，加入2mL 0.1mol/L高氯酸溶液，混勻，置于超聲清洗器中超聲20min，取出置于80℃水浴中加熱30min。取出冷卻后離心(4500r/min)15min。傾出上清液，沉淀用1mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，離心(4500r/min)10min，合并上清液，再重復(fù)一遍洗滌步驟，合并上清液。向上清液中加入約1g氯化鈉，加入2mL異丙醇+乙酸乙酯(40+60)，在渦旋式混合器上振蕩萃取5min，放置5min(若有乳化層稍離心一下)，小心移出有機(jī)相于5mL玻璃離心管中，按以上萃取步驟重復(fù)萃取兩次，合并有機(jī)相。將有機(jī)相在N2-濃縮器上吹干。用1mL 0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.0)充分溶解殘留物，經(jīng)筒式微孔過(guò)濾膜過(guò)濾完全轉(zhuǎn)移至5mL玻璃離心管中，并用0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.0)定容至刻度。

　　2、凈化

　　依次用10mL乙醇、3mL水、3mL 0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH6.0)、3mL水沖洗弱陽(yáng)離子交換柱，取適量前述a、b、c試樣中的提取液至弱陽(yáng)離子交換柱上，棄去流出液，分別用4mL水和4mL乙醇沖洗柱子，棄去流出液，用6mL乙醇+濃氨水(98+2)沖洗柱子，收集流出液。將流出液在N2-蒸發(fā)器上濃縮至干。

　　3、試樣測(cè)定前的準(zhǔn)備

　　于凈化、吹干的試樣殘?jiān)屑尤?00μL~500μL流動(dòng)相，在渦旋式混合器上充分振搖，使殘?jiān)芙?，液體渾濁時(shí)用0.45μm的針筒式微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，上清液待進(jìn)行液相色譜測(cè)定。

　　4、色譜參考條件

　　實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備: 高效液相色譜儀：K2025P2二元高壓輸液泵、K2025AS自動(dòng)進(jìn)樣器、K2025CO柱溫箱、K2025UVD紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、Wookinglab色譜工作站;

　　色譜柱：BDS或ODS柱，250mmx4.6mm，5μm;

　　流動(dòng)相：甲醇+水(45+55);

　　流速：1mL/min;

　　進(jìn)樣量：20μL~50μL;

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：244nm;

　　柱溫：25℃。

　　5、測(cè)試

　　吸取20μL~50μL標(biāo)準(zhǔn)校正溶液及試樣液注入液相色譜儀，以保留時(shí)間定性，用外標(biāo)法單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)法定量。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1] GB/T 5009.192-2003 動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定 第二法 高效液相色譜法(HPLC)