畜肉食品中4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)檢測的前處理方案-儀器儀表網(wǎng)

　　【儀器網(wǎng) 專題推薦】為規(guī)范化尼卡巴嗪在養(yǎng)殖雞群中的藥物治療，今年我國開始生效實施的GB31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥zui大殘留限量》中明文規(guī)定了DNC在肉食雞不同組織中的zui大殘留限量。

　　此文論述了怎樣把4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)由凈化后，轉化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢驗的形式。以提取、凈化為重點，根據(jù)國家標準GB29690-2013，為檢驗人員和相關領域科學研究人員給予一定的借鑒。

　　檢測項目：4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)

　　應用范圍：雞肌肉/雞蛋

　　液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

　　方法原理：試料中殘留的4,4’-二硝基均二苯脲，用乙腈提取，正己烷除脂，75 %甲醇水溶液萃取，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定，內(nèi)標法定量。

　　前處理儀器：

　　分析天平(感量0.00001 g和0.01 g);渦旋振蕩器;離心機;氮吹儀;離心管(50 mL);濾膜(0.2 μm)。

　　檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源

　　試樣制備與保存

　　1.雞蛋

　　取適量新鮮或冷藏的kong白或供試雞蛋，去殼，并使均質(zhì)。零下20 ℃以下保存。

　　取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，作為kong白試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為kong白添加試料。

　　2.雞肌肉

　　取適量新鮮或冷凍的kong白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。零下20 ℃以下保存。

　　取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，作為kong白試料;

　　取均質(zhì)后的kong白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為kong白添加試料。

　　前處理方法

　　提取與凈化

　　稱取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，添加10 μg/mL 4,4’-二硝基均二苯脲-D8標準工作液適量，加無水硫酸鈉2 g，乙腈8 mL，渦旋0.5 min，超聲5 min，5000 r/min離心10 min，取上清液，于40 ℃氮氣吹干，加75 %甲醇水溶液飽和的正己烷1 mL，渦旋10 s，再加75 %甲醇水溶液1.0 mL，充分渦旋混合，于40 ℃水浴中靜置5 min，2000 r/min離心5 min，取下層清液，濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

　　國標解讀及注意事項

　　1.DNC標準物質(zhì)用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的標準儲備液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3個月;DNC-D8標準物質(zhì)用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的標準儲備液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3個月。

　　2.前處理過程中使用乙腈提取目標化合物，無水硫酸鈉除水，正己烷除脂。

　　3.前處理過程中注意控制水浴溫度不超過40 ℃，防止目標化合物降解。

　　4.上清液濃縮后，加入正己烷和定容液，需要充分渦旋混合進行液液分配萃取，保證除脂效果;水浴靜置過程中觀察分層情況，可以適當延長靜置時間，保證水相與有機相分離完全。

　　5.同位素內(nèi)標加入量決定zui終定容后的理論上機濃度，務必與配制的標準曲線中各點同位素的濃度相一致，才能正確校正回收率。

　　6.液質(zhì)聯(lián)用儀負離子掃描檢測，為保證檢測靈敏度，建議正負離子掃描分開儀器進行。