【儀器儀表網(wǎng) 專題推薦】徠卡的激光顯微切割系統(tǒng)將通過精確切割您感興趣的細(xì)胞來改善您的工作流程。每一步都在視覺控制下進行,并且不會與周圍組織污染。
DNA 分析工作流程 - 步驟如下:
01.樣品準(zhǔn)備
通常,激光顯微切割使用特殊的基于膜的載玻片。LMD的樣本準(zhǔn)備是簡單的,可以從經(jīng)典的組織學(xué)準(zhǔn)備中得出。
石蠟包埋將組織樣本帶入可以切成薄片的狀態(tài)?;蛘撸梢岳美鋬銮衅瑏頊?zhǔn)備您的載玻片。如果有新鮮的癌組織可用,您應(yīng)該優(yōu)先選擇冷凍切片以保護核酸不被降解。
我們將為您的應(yīng)用提供合適的LMD載玻片。
02.固定和染色
一般來說,可以使用石蠟切片或冷凍切片。這里我們將概述冷凍切片的使用。
樣本切片應(yīng)在冷凍切片后立即用丙酮、乙醇或乙醇和醋酸的混合物固定和染色。
H&E 是一種常見的組織學(xué)染色,其中蘇木精染色細(xì)胞核,伊紅染色細(xì)胞質(zhì)。
H&E 染色適用于石蠟切片和冷凍切片。
03.可視化和 ROI 定義
徠卡 LMD激光顯微切割系統(tǒng)可以生成自動樣本概覽,便于輕松導(dǎo)航到您的感興趣區(qū)域 (ROI)。
您的 ROI 可以通過 AVC 軟件模塊自動識別和標(biāo)記,或者您可以手動應(yīng)用形狀。
04.激光顯微切割
接下來,定義的感興趣區(qū)域(ROIs)在視覺控制下被激光精確切割,并通過重力直接收集。視覺控制的切除可以防止腫瘤材料與健康細(xì)胞混合,從而扭曲結(jié)果。通過重力收集允許使用標(biāo)準(zhǔn)、經(jīng)濟實惠的 耗材,如 PCR 管或 8 條管。
此外,您可以使用“移動和切割”工具直接在飛行中切割樣本,而無需任何預(yù)定義形狀。
我們提供適合您符合需求的LMD激光顯微切割系統(tǒng)。
05.DNA提取
徠卡顯微系統(tǒng)推薦使用高質(zhì)量的 QIAGEN 試劑盒(QIAamp? DNA Micro Kit)用于核酸的制備。
它們可以立即用于下游應(yīng)用,如 PCR、測序、定量實時 PCR,或者可以在-20°C 下存儲,直到需要時使用。
06.DNA突變分析
DNA 突變分析是通過下一代測序(NGS)進行的。
其他技術(shù)如焦磷酸測序或經(jīng)典的 DNA 桑格測序也適用。