【中國儀器儀表網(wǎng) 專題推薦】液相色譜柱是高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)中的關(guān)鍵組成部分，其使用壽命直接影響分析的準確性和重復(fù)性。

　　Q：我的色譜柱只能進樣大約100針。100針之后，峰型會畸變，塔板數(shù)也會變得非常低。這是什么原因呢？

　　A：

　　100針之后就峰型畸變，塔板數(shù)非常低，不能繼續(xù)使用，這個壽命確實很短。在正常情況下，液相色譜柱的使用時間會更長一些。這類壽命短有以下兩種情況：

　?。?）以前用于相同檢測的色譜柱壽命比現(xiàn)在這個色譜柱的壽命長。此種情況下，可以探究一下該實驗是否所有條件真的都保持不變。

　?、?樣品組成是否已改變？因為如果樣品中新引入了強吸附的污染物就會破壞色譜柱的性能。

　　② 儀器流體路徑上的密封件是否狀況良好？因為脫落密封碎屑會堵塞柱入口的篩板和填料，從而導致柱壓升高，色譜柱性能被損壞。

　?。?）用于此樣品檢測的所有色譜柱的壽命均這么短。實驗人員可以確定色譜條件沒有變化。

　?、?色譜柱填充床的機械弱點。這可能是由于在實驗室里對柱子的存放不得當導致的，比如摔打過或者碰撞過？這種問題一般只有在使用之后才能顯示出來。

　?、? 色譜條件不科學。可能是色譜條件中的流動相對色譜柱填料不友好，需要優(yōu)化色譜條件或者重新篩選色譜柱。比如流動相水相比例＞90%，這需要選擇可以耐受純水相的鍵合相的色譜柱；比如流動相的pH≤2，這需要用耐酸的鍵合相的色譜柱；比如流動相的pH≥10，則需要用耐堿的鍵合相的色譜柱。

　　Q：色譜柱的運輸和儲存都是規(guī)范的，并且流動相的水相比例不高，pH也在2-10之間，但是我的色譜柱總是只能用很短的一段時間，200針勉強能接受，100針就讓人不能接受了，因為這樣檢測成本就太高了。這種情況是什么原因?qū)е碌哪?？我能做什么樣的?yōu)化嗎？

　　A：

　　我完全同意您的觀點。我們需要做的是找到造成色譜柱壽命短的原因，然后看看，我們能做些什么優(yōu)化措施。

　　造成壽命短問題zui可能的原因是色譜柱的入口端樣品成分的吸附。它們可能因為在流動相中的低溶解度而沉淀，也可能被強吸附。當你注入的樣品越來越多時，這些污染物會堆積在色譜柱入口端，這樣就阻礙了樣品的正常吸附和分布，就導致了峰型畸變。這個問題通常也會伴隨著色譜柱背壓的增加。有以下幾種方法可以防止這種情況的發(fā)生：

　?。?）優(yōu)化樣品的前處理步驟。

　　采用SPE固相萃取小柱等具有類似化學性質(zhì)的樣品前處理耗材處理樣品來優(yōu)化。

　?。?）更有效的方法是使用保護柱。

　　分析色譜柱的入口端作為zui易損壞的部分，在分析色譜柱的前端加裝一根保護柱來代替分析柱入口端被損壞，通過這樣的方式來延長分析色譜柱的使用壽命。為了使分析柱獲得zui佳性能，您需要使用一個與分析柱填料和粒徑完全相同的保護柱。如果使用的保護柱的粒徑更大，會導致色譜峰型展寬以及分離度變差。

　　Q：除了優(yōu)化樣品前處理和使用保護柱以外，是否還有其他解決方法呢？

　　A：

　　確實還有其他的解決方法，但它們都存在一些缺點。

　　（1）可以用溶劑來“清洗”色譜柱，這些溶劑應(yīng)該可以溶解色譜柱入口端的污染物。但是在許多情況下，這個過程根本不起作用 。

　　例如，如果污染物是沉淀在色譜柱入口端的密封圈碎屑，根本不可能溶解它們。此外，每次洗滌也會讓鍵合相有水解的風險，因此重復(fù)的洗滌實際上會導致色譜柱的加速老化。并且，在洗滌之后，你必須用流動相重新平衡你的色譜柱，這也是相當耗時的。

　?。?）還有一種經(jīng)常嘗試的方法是反向“再生”色譜柱。它需要用不同的溶劑切換沖洗色譜柱，需要很多時間，直到污染物被去除，或者它可能根本除去不了污染物。